(ANA) screening: Antinukleære antistoffer, Hep-2 celler (mønster)

Definition

• Undersøgelsen er en screening for tilstedeværelsen af en række antinukleære antistoffer

Synonymer

• Synonymer: ANA-screening; Hep-2- ANA screening; ANF; Antinukleær factor; Bindevævssygdom-relateret antistof; ANA; IIF, CTD-Screening

Indikationer¹

• Udførelse af ANA -screening er indiceret hvis ≥ 1 af flg. er til stede:
  

  • Arthritis (nonerosiv, 2 eller flere led)

  • Serositis (symptomer på eks. pleuritis, pericarditis)

  • Puffy hands

  • Alopeci

  • Lysoverfølsomt hududslæt

  • Proteinuri (persisterende)

  • Anæmi og/eller øvrige immunmedierede cytopenier

  • Hudforandringer  forenelig med SLE, scleroderma, dermatomyositis, vasculitis

  • Raynaud’s fænomen (nylig debut)

  • Orale ulcera 

  • Mundtørhed og/eller øjentørhed

  • Progredierende symmetrisk muskelsvækkelse og vedvarende forhøjede muskelenzymer

  • Neurologiske symptomer (herunder kramper og psykose)

• Diagnostisk og differentialdiagnostisk udredning af bindevævssygdomme (reumatiske systemsygdomme)

  • Systemisk lupus erythematosus (SLE)

  • Sjögrens syndrom

  • Sklerodermi

  • Mixed connective tissue disease (MCTD)

  • Polymyosit/dermatomyosit

  • Juvenil polyarthritis (børn danner nogle gang andre antistofspecificiteter og derfor er IIF metoden mest velegnet) 

• Anden autoimmun systemsygdom

  • Kronisk aktiv hepatitis

  • Hypergammaglobulinæm

• Mistanke om medikamentel udløst LE syndrom (kun IIF metode) 

  • Hydralazin, procainamid og tetracyclin

Skal IKKE tages på baggrund af træthed, rygsmerter eller andre muskel/skeletsmerter alene 

Fortolkninger^1,2

• Analysemetoden til ANA screening (Indirekte immunfluorescens (IIF) eller EliA ANA CTD-screening) har betydning i forhold til anvendelse

  • Metoderne har forskellig sensitivitet og specificitet og forskellig forekomst af falsk positive og falsk negative

  • Kommunikation mellem rekvirent og laboratorium er derfor vigtig for optimal diagnostik

Generelt

• Positiv ANA skal ses i lyset af et samlet sygdomsbillede og i forbindelse med en nærmere immunologisk karakterisering

• Positiv ANA i kombination med kliniske fund indikerer reumatisk systemsygdom

• "Titeren" korrelerer ikke til sygdomsaktivitet eller prognose

• Tilfældigt fund af positiv ANA har lille informationsværdi

• ANA findes også hos raske (øget forekomst med stigende alder) og hos patienter med anden sygdom end ANA-associeret bindevævssygdom

• Ved rekvisition af ANA uden symptomer/klinik tydende på ANA-associeret bindevævssygdom vil der derfor være mange falsk positive resultater

Forekomst i % af specifikke antinukleære antistoffer ved forskellige sygdomme

Kilde: Pharmacia Diagnostics.

Test baseret på Hep-2-celler:

• Negativ ANA taler imod SLE

• Påvisning af antistoffer mod dsDNA er stærkt koblet til SLE og er en risikomarkør for komplikation i form af glomerulonefrit

• Antistoftiter for dsDNA kan anvendes som sygdomsaktivitetsmarkør

• Ud fra fluorescensmønster kan der efterfølgende undersøges for specifikke antistoffer

Fejlkilder (og kilder til normal variation)

• Undersøgelsen er svagt positiv hos 5 % raske personer, dog hyppigere hos kvinder i klimakteriet og personer > 65 år

• Kvantitative immun-assays kan kun give positivt resultat med ANA rettet mod et af de 10-12 autoantigener i blandingen

  • En del falsk negative

Fysiologi og biokemi^1,2

• Kerneantistoffer omfatter

  • Antinukleære antistoffer (ANA) 

  • Antistoffer mod dobbeltstrenget DNA (dsDNA) 

  • Antistoffer mod ekstraherbart nukleær antigen (ENA)

• Ofte vil ANA screening påvise antistoffer mod dsDNA og ENA. ANA kan dog være negativ, men med positiv anti-dsDNA (lav titer) eller anti-ENA (SSA og Jo1)

• ANA er IgG antistoffer af subklasse 1 og 3

• ANA er en heterogen gruppe antistoffer, som er rettet mod det store antal strukturer (antigener), som normalt forekommer i cellekernen:

  • dsDNA - Dobbeltstrenget DNA (fosfatdeoxiribose)

  • SSA - Ro-52; Ro-60 ENA

  • SSB - SSB (La) ENA

  • Histon - Histoner-antistof ENA

  • snRNP - U1RNP (ribosomale nucleoprotein) ENA

  • Sm-antigen - Smith´s antistof ENA

  • Jo1 - histidyl-tRNA-yntetase ENA

  • Scl-70 - DNA-topoisomerase ENA

  • Centromer - CENP-B

• Antistoffer i patientserum binder sig til kerneantigener og blev i begyndelsen påvist med fluorecensmærket antistof rettet mod humant IgG i mikroskop. Nu bruges mest et sandwich immunassay (FEIA), men den mikroskopiske metode ((ANA (mønster, imm.flu.) gruppe;P - NPU29715 )) udføres på nogle Klinisk Immunologiske afdelinger 

• Beroende på, hvilke autoantistoffer der findes i patientens serum, fremkommer der 8 forskellige mønstre ved mikroskopi. De forskellige mønstre har forskellig specificitet for sygdom

• Øget koncentration af ANA antistoffer er korreleret med systemisk bindevævssygdom

• Autoantistoffers betydning for patogenesen er uklar

Prøvetagning

• Veneblodprøve

  • Serum – rør uden antikoagulans - rød prop med eller uden gel

• På samme rør kan udføres anti-dsDNA og anti-ENA, udtitrering samt analyse for specifikke antistoffer

Referenceintervaller/svarafgivelse

P-Antinukleær antistof (ANA-EliA) 

• Negativ: < 0,7

• Gråzone: 0,7 – 1,0

• Positiv: > 1,0

P-Antinukleær antistof (ANA-Hep-2)(IIF)

• Negativ

• Cut-off > svag positiv

• Resultatet afgives for hvert mønster som negativt eller positivt

• Positive svar semikvantiteres i svagt, middel eller stærkt positiv ud fra fluorescensens styrke ved serum fortyndet 1:160

NPU-koder og -navne

• NPU28402

Navne

• Kort helterm

  • P—Bindevævssygdom-relateret antistof; arb.stofk.(proc.) = ? (p.d.e.)

• Brugsnavn

  •  Bindevævssygdom-relateret-Ab[ANA];P

Analysetest⁴

• Fluoroenzyme Immuno Assay (EliA) CTD-screening (Connective Tissue Disease-screening)

  • Metoden er automatiseret

  • Metoden vil reagere med specifikke auto-antigener tilsat reagenset (typisk omkring 15 autoantigener)

  • Høj positiv prædiktiv værdi (Meget høj specificitet, lidt lav sensitivitet) og risiko for falsk negative 

• Indirekte immunfluorescens (IIF) teknik på humane epiteliale celler (Hep-2 celler):      

  • Manuel og ressourcekrævende

  • Her anvendes humane cellelinjer = Hep-2 celler, der er en larynxkarcinomcellelinje. Disse celler har en særlig velegnet kernemorfologi og stor mitoseaktivitet, som gør det muligt at skelne mellem 8 forskellige fluorescensmønstre

  • Denne metode vil afdække reaktioner med et hvilket som helst antigen i Hep-2-cellerne

  • Høj negativ prædiktiv værdi (Høj sensitivitet, lav specificitet) og risiko for falsk positive 

Opfølgning af unormalt prøvesvar

• Specialistopgave og bør målrettes den kliniske mistanke

• Det er kun indiceret at udrede svagt positive ANA, såfremt der er bestyrket klinisk mistanke om en ANA-associeret bindevævssygdom

• Hvis symptomer og kliniske find ikke peger entydigt i en retning, kan der undersøges for et lidt større panel af specifikke antistoffer  

• Ved negative ANA som ikke stemmer med klinikken, bør der tages kontakt til laboratorium mhp. udredning

Vejledninger

• ANA-screening | Vælg Klogt (vaelgklogt.dk)